Цель исследования - разработать метрологически аттестованную методику выполнения измерений содержания циклофосфамида в воздухе рабочей зоны.

Научная новизна. Впервые в Республике Беларусь разработана методика измерения содержания циклофосфамида в воздухе рабочей зоны.

Методика основана на концентрировании циклофосфамида из воздуха на бумажные обеззоленные фильтры «синяя лента», десорбции его с фильтров ацетонитрилом и количественном определении методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при длине волны 198 нм.

Разработка производилась на жидкостном хроматографе Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, США) с диодно-матричным детектором. В соответствии со структурной формулой анализируемого вещества была подобрана колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, диаметром 4,0 мм, зернением 5 мкм Hypersil ОDS. В качестве растворителя был выбран ацетонитрил, поскольку циклофосфамид легко растворим в полярных растворителях, таких как вода, этанол, ацетонитрил, метанол.

Для отработки методики в качестве подвижной фазы были использованы смеси растворителей: ацетонитрил - деионизованная вода; метанол - деионизованная вода, ацетонитрил: буферный раствор с рН 4,0 в разных соотношениях, температура колонки - 30 °С, время анализа - 10 мин. В качестве подвижной фазы была выбрана смесь ацетонитрил + деионизованная вода, поскольку при использовании данной смеси в соотношении 75 : 25 хроматографический пик являлся наиболее симметричным - коэффициент асимметрии был наиболее близок к 1. Длина волны подбиралась в соответствии с изучением спектра поглощения циклофосфамида в УФ-области.

На основании проведенных исследований были подобраны следующие условия хроматографирования: колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Hypersil ODS C18, зернением 5 мкм; подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - вода (75 : 25 по объему); скорость потока подвижной фазы: 0,3 см³/мин; температура колонки: 30 °С; рабочая длина волны: 198 нм; объем вводимой пробы: 30 мкл. При данных условиях минимально детектируемое количество циклофосфамида составило 7,5 нг.

При отборе проб воздух с объемной скоростью 10 дм³/мин протягивают в течение 25 мин с помощью аспирационного устройства через бумажный фильтр обеззоленный «синяя лента», помещенный в пластмассовый фильтродержатель. В одной точке отбирают не менее двух проб. При отборе проб одновременно измеряют температуру в месте отбора проб и атмосферное давление. Фильтры с отобранной пробой воздуха помещают в бюксы с притертой пробкой, пробы пригодны для анализа в течение 5 дней при хранении в защищенном от света месте при температуре не выше 25 °С.

Фильтры помещают в стеклянный флакон с завинчивающейся крышкой, приливают 10 см³ ацетонитрила. Стеклянные флаконы закрепляют на аппарате для встряхивания и взбалтывают в течение 30 мин. Растворитель сливают в круглодонную колбу, отжимая фильтр стеклянной палочкой, и упаривают на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С. Сухой остаток заливают 1 см³ ацетонитрила. Одновременно в качестве контрольной пробы используют чистый фильтр. Обработка контрольной пробы происходит при тех же условиях, что и исследуемых образцов.

Растворы анализируют на жидкостном хроматографе при описанных выше условиях. По градуировочному графику находят содержание циклофосфамида в контрольной и измеряемой пробах. Концентрацию циклофосфамида в растворах анализируемой пробы рассчитывают после вычитания значения площади контрольной пробы. Концентрацию циклофосфамида в воздухе рабочей зоны определяют, учитывая его содержание в растворе анализируемой пробы, полученное по градуировочному графику, объем пробы и объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям.

Диапазон измерения концентраций циклофосфамида в воздухе рабочей зоны и показатели точности методики в заданном диапазонах измерения приведены в таблице.

Таблица - Диапазон измерения циклофосфамида в воздухе рабочей зоны, показатели повторяемости, промежуточной прецизионности, максимальной расширенной неопределенности методики при доверительной вероятности р = 0,95

На основании исследований разработана МВИ.МН 5850-2017. «Массовая концентрация циклофосфамида в воздухе рабочей зоны. Методика выполнения измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии», утвержденная директором РУП «Научно-практический центр гигиены» 06.10.2017, в приложении к которой изложен алгоритм расчета и оценивания неопределенности измерений. Свидетельство о метрологической аттестации № 1035/2017 от 02.08.2017.