В производственной трансфузиологии основной целью является обеспечение инфекционной безопасности препаратов крови. ВОЗ рекомендуется использование как минимум двух методов вирусинактивации при производстве препаратов на основе плазмы человека. В настоящее время в Республике Беларусь не применяются методы вирусинактивации в рамках существующих производств препаратов на основе иммуноглобулинов человека. Таким образом, данная работа выполнена с целью создания и утверждения лабораторно-технологического регламента проведения вирусинактивации иммуноглобулина с возможностью его последующего внедрения в производство лекарственных средств (ЛС).

Новизна работы. Работы по определению оптимальных условий вирусинактивации растворов иммуноглобулина человека, а также расчету эффективности данного процесса в Республике Беларусь ранее не проводились.

Материалы и методы. В качестве модельных вирусов использовали следующие: ВИЧ (вирус иммунодефицита человека)-1, вирус бычьей диареи (ВБД) как модельный вирус гепатита С, вирус болезни Ауески (ВБА) как модельный вирус гепатита В.

Для накопления вируса ВИЧ-1 использовали перевиваемые Т-лимфобластоидные линии клеток МТ-4 (Т-клетки человека, трансформированные путем сокультивирования с инфицированными HTLV-1 лимфоцитами) и CEMSS (Т-лимфобластоидная линия клеток человека, полученная G.E. Foley et al. и клонированная P.L. Naraetal). Динамику инфекционного процесса контролировали c помощью инвертированного светового микроскопа «Nicon Eclipse TS 100» с учетом цитодеструкции клеток (образование многоядерных гигантских клеток-синцитиев) и положительной реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИФ).

Для накопления вируса болезни Ауески свиней использовали перевиваемую линию клеток ВНК-21 (почка новорожденного сирийского хомячка), полученную из коллекции научно-производственного Республиканского унитарного предприятия «Диалек» (№ 03/1288 от 24.06.2008). Титр вируса определяли согласно методике OIE Trrestrial Manual.

Для накопления вируса диареи крупного рогатого скота использовали перевиваемую линию клеток МDBK (почка быка), полученную из коллекции научно-производственного Республиканского унитарного предприятия «Диалек» (№ 03/1288 от 24.06.2008). Титр вируса определяли согласно методике OIE Trrestrial Manual.

Содержание иммуноглобулинов определяли фармакопейным методом (Государственная Фармакопея РБ II, 2.2.31) зонального электрофореза с использованием носителя ацетата целлюлозы на приборе для электрофореза.

Для выявления неполных антител в исследуемом образце иммуноглобулина использовали фармакопейный (Государственная Фармакопея РБ, 2.7.1) иммунохимический метод: пробу Кумбса.

Остаточное количество Тритона Х-100 определяли спектрофотометрическим методом с предварительной твердофазной экстракцией.

Остаточное количество ТНБФ (три-н-бутилфосфат) изучали методом газовой хроматографии.

Пирогенность и аномальную токсичность конечного лекарственного средства оценивали согласно соответствующим фармакопейным статьям РНПЦ трансфузиологии и медицинских биотехнологий.

В ходе исследования установлено: метод сольвент/детергентной обработки растворов иммуноглобулина человека подтвердил свою эффективность в отношении ВИЧ-1, а также модельных вирусов гепатита В и гепатита С (ВБА и ВБД соответственно). Снижение титра вируса ВИЧ-1 составило ≥6,0 lg, ВБА ≥7,7 lg и ВБД ≥6,8 lg.

Содержание иммуноглобулина в растворе, прошедшем сольвент/детергентную обработку, составило не менее 99,9% от общего белка и соответствует требованиям ФСП РБ 0943-11.

Специфическая активность антирезус анти-D антител в процессе сольвент/детергентной обработки сохранилась на 100% и соответствует требованиям ФСП РБ 0943-11.

Используя данные, полученные при определении остаточного количества ТНБФ в растворе иммуноглобулина 10% путем газовой хроматографии, рассчитали концентрацию вещества, которая составила 13,0 мкг/мл. Остаточное количество сольвента соответствует международным нормам 3-25 мкг/мл.

Остаточное количество Тритона Х-100 в растворе иммуноглобулина 10%, определенное спектрофотометрическим методом, составило 9,12 мкг/мл, что соответствует международным нормам 3-25 мкг/мл.

По результатам анализа на аномальную токсичность и пирогенность ЛС признано нетоксичным и апирогенным.

По результатам анализа на пирогенность лекарственное средство признано апирогенным.

Вывод. Сольвент/детергентная обработка препаратов иммуноглобулинов является эффективным методом полной инактивации модельных вирусов.

В качестве выходной продукции был составлен лабораторно-технологический регламент - «ВИРУСИНАКТИВАЦИЯ РАСТВОРА ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА». Данный регламент позволяет внедрять сольвент/детергентную обработку растворов иммуноглобулина человека в существующие и будущие производства лекарственных средств на основе иммуноглобулина в Республике Беларусь.

Вид патентной защиты: отсутствует, планируется подача заявки.