Цель - разработать оптимальные панели имму­ноцитохимических маркеров для дифференциальной и уточняющей цитологической диагностики злокаче­ственных опухолей в плевральных жидкостях.

Адекватное иммуноцитохимическое исследование признано неотъемлемой частью цитоморфологическо­го анализа современного уровня, поскольку оно спо­собствует уточнению гистологической формы ново­образования, а во многих случаях и органной принад­лежности опухоли. К настоящему времени разработано большое количество антител, но идеального маркера обладающего 100% чувствительностью и специфично­стью, пока не существует. Как правило, с активным ис­пользованием антител в клинической практике снижа­ются показатели диагностической специфичности, за­явленной разработчиками. Показано, что применение большого количества антител (более 6) не обеспечи­вает максимально высокой диагностической точности, но при этом значительно увеличивает стоимость иссле­дования. Исходя из этого, одним из приоритетных на­правлений научных исследований является создание алгоритмов для выбора адекватной панели маркеров, которая позволяет при наименьшем количестве исполь­зованных антител добиться максимальной точности в определении патологического процесса.

Материалом исследования служили плевральные жидкости пациентов с онкологическими заболеваними, обработанные с помощью цитоцентрифуги Cytospin-4 (Великобритания) и центрифуги Kubota 8100 (Япония). Приготовленные из центрифугата цитологические пре­параты окрашивали по Паппенгейму и микроскопиро­вали для определения адекватности клеточного мате­риала и установления цитологического диагноза. Раз­работаны методики приготовления клеточных блоков на материале 70 выпотных жидкостей; апробированы методики иммунофенотипирования с реагентами про­изводства BioGenex на материале 56 контрольных об­разцов ткани и 10 клеточных блоков (148 иммуноцито­химических реакций).

На микросрезах клеточных блоков 49 пациентов вы­полнено иммунофенотипирование с 15 антителами: 12 - производства BioGenex (СЕА, ЕМА, МОС-31, СК7, СК20, Wilm’s Tumor, p63, TTF-1, GCDFP-15, ER, PR, Glut-1) и 3 - производства Dako (Calretinin, Ber-EP4, D2-40). Создан банк данных иммуноцитохимических исследований: база в формате «Microsoft Office Excel», 593 цитологических препарата, 153 клеточных блока и микропрепараты 862 иммуноцитохимических реакций. Для достижения поставленной цели отобраны плев­ральные жидкости 40 пациентов, страдающих раком молочной железы (протоковая аденокарцинома), раком легкого (аденокарцинома), злокачественной мезотели­омой, а также с выпотом реактивного характера - по 10 наблюдениям (злокачественная опухоль верифици­рована гистологически). При оценке результатов им­мунофенотипирования в задачу настоящего исследова­ния входило определение локализации адгезии хромо­гена в клетке, интенсивности окраски и доли окрашен­ных клеток-мишеней. Проведена статистическая обра­ботка данных иммуноцитохимических исследований с использованием ROC-анализа и метода логической ре­грессии в программе R v.2.14.0.

Установлено, что идентификация злокачественно­го характера процесса возможна с помощью антител ЕМА и Glut-1 (чувствительность и специфичность со­ответственно 95,8±4,0 и 90,0±9,4; 66,7±9,6 и 100%). На­дежными маркерами эпителиальной принадлежности клеток в экссудате являются антитела Ber-EP4, MOC-31 (чувствительность по 100%) и CEA, EMA (чувстви­тельность по 95,7±4,3%), мезотелиальными маркера­ми - Calretinin, Wilm’s Tumor и D2-40 (чувствитель­ность 100, 100 и 84,6±10,4% соответственно). Наибо­лее специфичным маркером органопринадлежности, свидетельствующим в пользу рака легкого, является TTF-1 (61,5±14,0% чувствительность и 100% специ­фичность). Показано, что антитело GCDFP-15 не мо­жет быть рекомендовано для распознавания клеток рака молочной железы вследствие его невысокой чув­ствительности (60,0±16,3%) и низкой специфично­сти в отношении других злокачественных опухолей (62,5±12,5%).

В настоящей работе минимальные панели составле­ны с учетом нозологической единицы новообразования в дифференциально-диагностической паре; для каж­дой патологии предложены антитела не только с мак­симальными показателями чувствительности и специ­фичности, но и более яркой интенсивностью окраши­вания, что облегчает идентификацию окрашенных кле­ток; соблюден главный принцип построения оптималь­ной панели, основанный на применении двух положи­тельных и двух отрицательных маркеров для каждого диагноза.

Панель антител для разграничения клеток злокаче­ственной опухоли и реактивно измененного мезотелия включает ЕМА, MOC-31, Wilm’s Tumor и Glut-1; аде­нокарциномы молочной железы (протоковый рак) и ре­активно измененного мезотелия - MOC-31, Ber-EP4, Wilm’s Tumor и D2-40; аденокарциномы легкого и реак­тивно измененного мезотелия - СЕА, MOC-31, Wilm’s Tumor и Calretinin. Диагностическая точность указан­ных панелей составила 100% с 95% доверительными интервалами: нижний в пределах 71,7-87,4%, верхний - 80,0-99,7%.