Разработка современных методов диагностики инфекционных заболеваний, вызванных вирусами-возбудителями геморрагических лихорадок особо опасной и опасной (природно-очаговой) группы, важ­на для обеспечения биологической безопасности лю­бого государства, в т. ч. и Республики Беларусь. Это обусловлено развитием международных интеграцион­ных экономических процессов, ростом межэтнических и культурных контактов, увеличением миграционных потоков населения в силу экологических или экономи­ческих факторов, что приводит к возникновению но­вых или расширению ареалов известных опасных и особо опасных инфекционных заболеваний, вызывае­мых, в основном, РНК-геномными вирусами семейств: Arenaviridae, Filoviridae, Flaviviridae, Bunyviridae. Для Республики Беларусь наибольшую опасность пред­ставляет занос особо опасных вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки Ласса, Эбола, Мар­бург. В определенной степени это относится к виру­сам Западного Нила, клещевого энцефалита, геморра­гической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ), лихорадки Денге, желтой лихорадки и других арбови­русов. Также немаловажным фактором является то, что вирусы особо опасной группы могут быть использова­ны в качестве биотеррористических агентов.

Отсутствие средств специфической профилакти­ки и лечения геморрагических лихорадок, вызываемых вирусами особо опасной группы, обусловливает не­обходимость как можно более быстрого установления этиологического агента с целью дальнейшего проведе­ния адекватных противоэпидемических, профилакти­ческих и лечебных мероприятий.

Целью настоящего исследования являлась разра­ботка диагностических лекарственных средств: ре­комбинантной иммуноферментной тест-системы для одновременной серологической диагностики вирусов Ласса, Марбург, Эбола, геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), Крымской-Конго ге­моррагической лихорадки (ККГЛ), лихорадки Запад­ного Нила (ЗН) методом Лиа-иммуноблоттинга (ИБ), и тест-системы для индикации возбудителей природно-очаговых, арбовирусных и особо опасных вирусных инфекций методом обратной транскрипции (ОТ)-по­лимеразной цепной реакции (ПЦР).

При разработке рекомбинантной иммунофермент­ной тест-системы для одновременной диагностики вирусов Ласса, Марбург, Эбола, ГЛПС, ККГЛ, ЗН ме­тодом Лиа-ИБ использованы биотехнологические ме­тоды, позволившие экспрессировать в бактериальных клетках E. coli, штамм BL21 (DE3), рекомбинантные полипептиды, включающие антигензначимые участки нуклеокапсидных белков соответствующих вирусов. В дальнейшем с использованием метода аффинной металлохелатной хроматографии были получены вы­сокоочищенные лекарственные средства рекомбинант­ных полипептидов, показана их способность связывать гомологичные антитела, находящиеся в сыворотке кро­ви, что в свою очередь обусловило возможность их ис­пользования в качестве основных вирусных антигенов для разработки иммуноферментной диагностической тест-системы. Разработанная тест-система не имеет оте­чественных и зарубежных аналогов и позволяет одновре­менно проводить выявление и дифференциацию антител к особо опасным (Ласса, Марбург и Эбола) и природно-очаговым (ГЛПС, ККГЛ, ЗН) вирусам с эксперименталь­но установленными диагностическими параметрами чув­ствительности 95-97% и специфичности 95-98%.

Разработка тест-системы для индикации возбудите­лей природно-очаговых, арбовирусных и особо опас­ных вирусных инфекций методом обратной транс­крипции-полимеразной цепной реакции основана на использовании специально подобранных специфиче­ских олигонуклеотидов (праймеров), комплементар­ных определенным участкам геномов флавивирусов (вирус клещевого энцефалита, вирусы лихорадок Ден­ге и ЗН), филовирусов (вирусы Марбург, Эбола), арена­вирусов (Ласса), буньявирусов (ККГЛ, ГЛПС). В состав тест-системы включены разработанные стандартизиро­ванные контроли: контроль этапа выделения РНК, кон­троли прохождения ОТ-ПЦР. Лабораторные испытания данной тест-системы показали ее высокую чувствитель­ность (1х103 ГЭ/мл) и специфичность (до 98%).

Таким образом, комплексное использование разрабо­танных диагностических лекарственных средств (реком­бинантной иммуноферментной тест-системы для одно­временной серологической диагностики вирусов Ласса, Марбург, Эбола, ГЛПС, ККГЛ, ЗН методом Лиа-ИБ) и тест-системы для индикации возбудителей природно-очаговых, арбовирусных и особо опасных вирусных ин­фекций методом ОТ-ПЦР позволит более качественно осуществлять диагностику данного комплекса возбуди­телей и проводить необходимые противоэпидемические мероприятия в максимально сжатые сроки.