Главным специфическим осложнением аллоген­ной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) является реакция трансплантат-против-хозяина (РТПХ). При НLA-совместимых трансплантациях частота острой РТПХ составляет 30-70%, а смертность от РТПХ и осложнений на фоне ее лечения - 20-50%. Одним из перспективных методов лечения стероидорезистентной формы РТПХ является трансплантация мезенхимальных стволовых клеток (МСК). Исследования in vitro показа­ли, что МСК супрессируют активность и пролиферацию Т-клеток, что может применяться в целях профилактики и лечения острой и хронической РТПХ после аллоген­ных ТГСК у пациентов. Это подтвердили и клинические работы по трансплантации МСК при аллогенной ТГСК в случае HLA-несовместимости между донором и реципи­ентом. Нами были подобраны оптимальные условия куль­тивирования in vitro МСК, выделенные из костного моз­га аллогенных доноров, и проведено пилотное исследова­ние по применению in vitro полученных МСК для лечения стероидорезистентной формы РТПХ. В нашем исследо­вании участвовало 24 ребенка, у которых после аллоген­ной ТГСК несмотря на назначение иммуносупрессивных средств в режиме кондиционирования и посттранспланта­ционном периоде развилась стероидорезистентная форма РТПХ, острая (II-IV степени тяжести) или хроническая. Тринадцать пациентов с подписанным информирован­ным согласием на участие в исследовании получили ин­фузию МСК, 11 назначали только иммуносупрессивную терапию (они выступали в качестве контрольной груп­пы). Трансплантат МСК получали путем выделения кле­ток из 30-60 мл костного мозга родственных или нерод­ственных доноров с последующей экспансией клеток в те­чение 3 пассажей в среде IMDM с добавлением 10% ЭТС, L-глутамина и 2-меркаптоэтанола. МСК наращивали in vitro до необходимого количества в зависимости от мас­сы пациента. Клетки, снятые с поверхности культураль­ных флаконов последнего пассажа, дважды отмывали в физиологическом растворе, переносили в шприц в объеме 20 мл для последующей инфузии пациенту. Клетки, нара­щенные in vitro, были идентифицированы по наличию по­верхностных маркеров CD105, CD90, CD44, характерных для МСК и отсутствию маркеров гемопоэтических клеток CD34, CD45, CD14. МСК из каждого пассажа исследова­лись на стерильность по всему спектру возможной бакте­риальной и вирусной контаминации. Был сделан цитоге­нетический анализ клеток различных пассажей и анализ их жизнеспособности. Применяемая нами технология вы­деления и экспансии МСК позволяет получить аллотран­сплантат МСК, в среднем содержащий 92,9±21,01 клеток, при этом число МСК было приумножено в 4,7?103 раза. Получен in vitro аллотрансплантат МСК из костного моз­га доноров для 13 пациентов, средняя доза клеток в кото­ром составляла 1,53±0,21?106/кг веса пациента. Иммуно­фенотипический анализ in vitro экспансированных клеток доказывает, что трансплантат содержит более 95% кле­ток, экспрессирующих мезенхимальные маркеры CD90, CD105, CD166. Результаты исследования кариотипа МСК, проведенного на клетках различных пассажей, свидетель­ствуют об отсутствии хромосомных аберраций в МСК по­сле длительного культивирования для экспансии клеток, что говорит о стабильности генома in vitro наращенных МСК, выделенных из костного мозга. При инфузии паци­ентам не наблюдался побочный эффект ни в момент вве­дения клеток, ни в ближайшее время после процедуры. Результаты 3-летнего наблюдения показали, что смерть от РТПХ в группе пациентов, получивших в качестве лече­ния МСК, достоверно ниже, чем на фоне иммуносупрес­сивной терапии, и составляет 18% против 55% (р = 0,03). Медиана продолжительности жизни после аллогенной ТГСК составляла 23,6 (8,4-45,2) мес. в группе лиц, полу­чивших МСК, и только 4,6 (2,2-47,3) мес. в контрольной группе (p = 0,02). Общая выживаемость также достоверно выше у пациентов, которым проведена инфузия МСК, и составляет 0,34±0,16, тогда как после стандартной имму­носупрессивной терапии только 0,18±0,11 (p = 0,02).

Таким образом, отработана технология получения эф­фективного трансплантата МСК из костного мозга доно­ров, который соответствует основным критериям каче­ства для in vitro полученных МСК, принятым International Society for Cellular Therapy. Выявлено снижение смерт­ности от РТПХ и увеличение общей продолжительности жизни у пациентов со стероидорезистентной РТПХ II-IV степени тяжести, получивших МСК, что является доказа­тельством целесообразности применения МСК для лече­ния этого осложнения аллогенной трансплантации ГСК.

Предложен новый метод применения аллогенных ме­зенхимальных стволовых клеток для лечения стероидоре­зистентной формы РТПХ, развившейся после аллогенной ТГСК.