Цель работы - охарактеризовать представление ген­ных сегментов вариабельной области тяжелой цепи имму­ноглобулина (IgVH) у белорусских пациентов с хрониче­ским лимфоцитарным лейкозом (ХЛЛ).

Исследование клональной перестройки и наиболее ча­сто встречающихся сегментов гена IgVH определяет сущ­ность достижения.

Впервые приведена характеристика субпопуляции бе­лорусских пациентов с ХЛЛ по представлению различных сегментов семейства VH в составе гена IgVH, мутацион­ный статус которого имеет установленное прогностиче­ское значение при этом заболевании.

Исследовали 37 образцов клеток белорусских пациен­тов с ХЛЛ.

Для определения клональной перестройки генов IgVH кДНК амплифицировали в 6 отдельных реакциях с ис­пользованием праймеров, специфичных к VH-семействам, и консенсусного праймера JH. Если с этим набором кло­нальность установить не удавалось, использовали прайме­ры, рекомендованные BIOMED-2. ПЦР-реакцию проводи­ли в программируемом термостате «Perkin Elmer» в объе­ме 25 мкл, в составе 3 мкл 5-кратного разведения кДНК, 5 пмоль каждого праймера и смеси для ПЦР (Promega). По­сле первоначальной денатурации (5 мин при 95 ?С) цикл с условиями: 95 ?С - 30 с, 60 ?С - 30 с, 72 ?С - 30 с повто­ряли 35 раз, после чего следовала 10-минутная элонгация продукта (при 72? С). Клональный продукт очищали в 2% агарозном геле, после чего элюировали с помощью набора Diatom DNA Elution (Биоком, Россия). ПЦР-продукт сек­венировали с использованием праймера, специфичного семейству перестроенного VH-гена, или с JHcons с исполь­зованием набора Big Dye Terminator на автоматическом секвенаторе ABI PRISM 3100-Avant (Applied Biosystems, Foster City, CA). Полученные последовательности анали­зировали в базе данных IgBlast.

Частота встречаемости случаев, в которых опухоле­вый клон состоит из клеток, прошедших стадию сомати­ческой гипермутации (M-ХЛЛ) (процент гомологии менее 98%), в белорусской популяции составляла 40,6% (15/37). Количество случаев без мутации (процент гомологии бо­лее 98%, Н-ХЛЛ) - 59,4%. Основные закономерности для белорусских пациентов совпадают с тенденциями, от­меченными для пациентов Российской Федерации и Укра­ины. Как в белорусской группе, так и у ближайших сосе­дей (Россия, Украина), а также у пациентов Северной Ев­ропы число больных без мутаций больше, чем с мутаци­ями IgVH.

Одновременно важно подчеркнуть, что идентифика­ция определенных сегментов VH в перестроенном гене опухолевого иммуноглобулина имеет значение для субпо­пуляционной характеристики заболеваемости ХЛЛ в раз­личных регионах, не говоря уже о возможности ее исполь­зования как маркера прогноза течения заболевания.

В клетках белорусских пациентов наиболее часто встречались сегменты VH1-69 (19%), VH3-30 (11%), сег­менты VH1-2, VH3-23, VH3-9, VH3-11 использовались с одинаковой частотой (8%). Наиболее близкой по распре­делению сегментов является российская и украинская субпопуляция. Аналогичное распределение пациентов ха­рактерно для Северной Европы, однако ген VH1-69 там встречается реже (12 против 19%). В то же время в Евро­пе очень распространен ген VH3-21 (11%), который прак­тически отсутствует в российской и белорусской субпопу­ляциях пациентов (таблица)

В странах Западной Европы, в Иране, напротив, пре­обладают больные с мутациями в генах IgVH (50-69%) по сравнению с числом больных без мутаций (31-50%). Но если в Западной Европе распределение наиболее часто встречающихся генов вариабельного региона IgVH близ­ко к североевропейскому и российско-белорусскому, то в Иране преобладает использование VH-генов 3-7 и 3-48. В субпопуляции пациентов ХЛЛ Китая также выражено преобладание случаев с мутацией (69,2%), однако сегмен­ты VH1-69 и VH3-21 не представлены в данной субпопу­ляции. Таким образом, согласно полученным нами дан­ным, белорусская субпопуляция по исследованным по­казателям ближе к российской, украинской и североевро­пейской.

Таким образом, частота встречаемости семейств генов IgVH указывает на отличия ограниченной белорусской субпопуляции пациентов с ХЛЛ от пациентов стран За­падной Европы и Востока, свидетельствуя о возможных различиях этнических факторов или факторов окружаю­щей среды, участвующих в развитии ХЛЛ.