Целью работы было исследование особенно­стей апоптоза, пролиферации, лекарственной ре­зистентности в иммунофенотипически гетероген­ных субпопуляциях лейкемических клеток.

В работе использовали образцы лейкемиче­ских клеток с установленной иммунофенотипиче­ской гетерогенностью пациентов (1-18 лет) с диа­гнозами острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) и острый миелоидный лейкоз (ОМЛ).

Анализ фенотипической гетерогенности был проведен для 89 пациентов с ОЛЛ и 40 - с ОМЛ. Из них 74 пациента - с первичным ОЛЛ, 15 - с рецидивом ОЛЛ, 25 - с первичным ОМЛ, 15 - с рецидивом ОМЛ.

Разделение лейкемических субпопуляций про­водили методом сортировки на аппарате F ACSVan-FACSVan­tage SE для 17 пациентов с ОЛЛ и 13 - с ОМЛ. Чистота разделения клеток составляла не менее 98%. На рисунке представлен пример гетерогенной экспрессии CD34 и стратегия разделения иммуно­фенотипически гетерогенных лейкемических суб­популяций.

Интактные лейкемические клетки были выде­лены на основании показателей прямого и боково­го светорассеивания (R1), а также по экспрессии CD45 FITC (нормальные клетки костного мозга характеризуются более высокой степенью экс­прессии CD45 по сравнению с лейкемическими). Затем гетерогенную популяцию лейкемических клеток разделяли на субпопуляции: с высокой (CD34PE (R2)) и низкой (CD34PE (R3)) степенью экспрессии.

В выделенных субпопуляциях лейкемических клеток исследовали способность к спонтанному и лекарственно-индуцированному апоптозу; осо­бенности клеточного цикла; экспрессию генов ле­карственной резистентности MDR1, BCRP, LRP и антиапоптотического гена BCL-2 методом относи­тельной количественной ПЦР.

В результате работы было установлено, что лей­кемические клетки пациентов с первичной ОЛЛ и ОМЛ наиболее часто гетерогенны по экспрессии CD13, CD15, CD34. Дополнительно лимфобластные опухолевые клетки характеризуются гетерогенной экспрессией CD20, CD33, CD45, тогда как миело­идные - DR и CD117. Лейкемические клетки па­циентов с рецидивами ОЛЛ и ОМЛ наиболее часто гетерогенны по экспрессии CD13. Дополнительно лимфобластные опухолевые клетки характеризуют­ся гетерогенной экспрессией CD20 и CD33, тогда как миелоидные - DR, CD117, CD34 и CD15.

Выявлена различная способность лейкемиче­ских популяций, различающихся по степени экс­прессии маркеров CD34, CD117, CD15 при ОМЛ и CD34, CD20, CD45 при ОЛЛ к спонтанному и лекарственно-индуцированному апоптозу. Уста­новлена закономерность, согласно которой CD34+ лейкемические популяции характеризуются сни­женным уровнем спонтанного апоптоза по срав­нению с CD34^- лейкемическими клетками.

Установлено увеличение пролиферативной ак­тивности CD34⁺ лейкемических клеток по сравне­нию с CD34^- клетками при Т-линейных ОЛЛ. При В-линейных ОЛЛ различий в пролиферативной активности лейкемических клеток между CD34⁺ и CD34^- субпопуляциями не выявлено. При ОМЛ достоверных различий по количеству пролифери­рующих клеток между лейкемическими субпопу­ляциями с различной степенью экспрессии CD34, CD117 не выявлено.

Показано увеличение экспрессии LRP гена в CD34^- лейкемических клетках по сравнению с CD34⁺ клетками при Т-линейных ОЛЛ. При В-линейных ОЛЛ значительных различий в экспрессии генов MDR1, LRP и BCRP между CD34⁺ и CD34^- лейкеми­ческими субпопуляциями не выявлено.

При ОМЛ установлено увеличение экспрессии MDR1 и BCL-2 генов в CD34⁺ субпопуляциях лейке­мических клеток. М4 вариант острого миелоидного лейкоза характеризовался увеличением экспрессии LRP гена в CD34^- лейкемических клетках.

Стратегия выделения CD34+ и CD34- лейкемических субпопуляций: A - распределение мононуклеарных клеток костного мозга по прямому (FSC) и боковому (SSC) светорассеиванию; B - распределение клеток по экспрессии CD45/CD34