В экспериментах по совместному культиви­рованию мезенхимальных и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) доказана способность мезенхимальных стволовых клеток (МСК) под­держивать гемопоэз in vitro (Koller, 1996; Breems, 1997). Воздействие МСК на предшественники ге­мопоэза осуществляется посредством секреции растворимых цитокинов, хемокинов, пептидов, медиаторов, гормонов и образования внекле­точного матрикса из молекул коллагена, фибро­нектина, ламинина, обеспечивающих адгезию гемопоэтических клеток, необходимую для про­лиферации ранних клеток-предшественников гемопоэза. Результаты клинического обследова­ния женщин, страдающих раком молочной же­лезы, продемонстрировали позитивное влияние котрансплантации МСК при аутотрансплантации ГСК периферической крови на сокращение времени восстановления нейтрофилов и тромбоцитов в раннем посттрансплантационном периде (Кос, 2000).

Цель исследования - изучение возможности применения аутологичных МСК, полученных из костного мозга детей со злокачественными ново­образованиями, для сокращения периода нейтро­пении после аутотрансплантации ГСК при недо­статочности CD34+ клеток в трансплантате.

Сущность достижения - доказательство эф­фективности котрансплантации аутологичных МСК для ускорения приживления ГСК при заве­домо низкой дозе CD34+ клеток в трансплантате после лейкафереза.

В исследование были включены 24 ребен­ка, у которых содержание CD34+ клеток в ауто­трансплантате было ниже нормы и составляло 2 × 10⁶/кг. Из них аутологичная котрансплантация МСК проводилась 7 подросткам (15-17 лет), со­держание CD34+ клеток в их аутотрансплантате было ≤ 1,3 × 10⁶/кг. Результаты аутотранспланта­ции ГСК 17 пациентам, которым были введены только ГСК, рассматривали в качестве контроля. Количество циклов полихимиотерапии (от 4 до 10 циклов) зависело от специфического ответа на терапию, развития рецидива, невосприимчивости к терапии. МСК были изолированы из костного мозга пациентов за 30-50 дней до аутологичной трансплантации и подверглись экспансии in vitro. Всем пациентам был выполнен анализ колоние-образующих единиц фибробластов (КОЕ-Ф) для определения пролиферативной активности МСК костного мозга.

В результате исследования установлено, что для получения эффективного трансплантата МСК необходимо 28,3±3,7 мл костного мозга пациен­та детско-го возраста. Число КОЕ-Ф у детей со злокачественными новообразованиями состави­ло 5,5±0,5 на 105 мононуклеарных клеток, что значительно ниже по сравнению с показателями КОЕ-Ф из проб костного мозга здоровых доноров (р=0,0003). Применяя технологию экспансии МСК in vitro, нам удалось увели-чить их количество в среднем в 104 раз и получить достаточный по со­держанию МСК трансплантат в течение 35,6±2,53 дня со дня эксфузии костного мозга у ребенка.

Показана прямая зависимость между числом циклов высокодозной химиотерапии, полученной пациентами до сбора клеток костного мозга и сро­ками формирования монослоя МСК в первичной культуре (r=0,79, p=0,03). Среднее число МСК, вве­денных больным в течение 1 ч после транспланта­ции ГСК, составило 0,6 (от 0,3 до 1,1) × 10⁶/кг.

Анализ полученных результатов свидетель­ствует о достоверном сокращении периода пост­трансплантационной цитопении у больных при котрансплантации МСК по сравнению с кон­трольной группой. Восстановление нейтрофилов до уровня более 500 клеток/мкл при котрансплан­тации МСК происходило через 10 дней (от 9 до 11 дней) по сравнению с 13 днями (11 15 дней) в контрольной группе (р=0,002), а восстановление лейкоцитов до уровня более 1000 клеток/мкл от­мечалось на 11день (10-13 дней) по сравнению с 14 днями (13-19 дней) (р=0,001).

По данным литературы, котрансплантация ГСК и МСК предполагает использование высокой дозы CD34+ клеток/кг в трансплантате ГСК больного - от 2,2 × 10⁶ до 13,9 × 10⁶ CD34+ клеток/кг (Cilloni, 2002; Кос, 2000). Проведенные нами исследова­ния показали эффективность котрансплантации аутологичных МСК в дозе 0,3 × 10⁶ клеток/кг для ускорения приживления ГСК при заведомо низкой дозе CD34+ клеток в трансплантате после лейка­фереза, а именно 0,64-1,3 × 10⁶ CD34+ клеток/кг в аутотрансплантате периферических стволовых клеток и 0,8-1,0 × 10⁶ CD34+ клеток/кг веса паци­ента в аутотрансплантате костно-го мозга.

Таким образом, использование аутологичных МСК в качестве котрансплантата дает возмож­ность избежать повторной мобилизации и коллек­ции стволовых клеток периферической крови или эксфузии значительного объема костного мозга для пополнения аутотрансплантата ГСК при его недостаточности. Доказана возможность получе­ния из костного мозга детей, подвергшихся про­должительной миелотоксической и радиационной терапии, оптимального количества МСК для про­ведения аутотрансплантации в ограниченные сро­ки, составляющие 30-40 суток. Новизна: показана необходимость применения аутологичных МСК для ускорения восстановления гемопоэза после аутотрансплантации ГСК при не-достаточности в трансплантате CD34+ клеток.