Целью работы являлось определение роли белка множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) P-gp 170 в регуляции процессов накопления порфириновых фотосенсибилизаторов (ФС) в лейкозных клетках. С использованием клеток линии IM9, их аналогов, резистентных к винкристину (IM9-Vinc) и таксатеру (IM9-Tax), а также опухолевых клеток костного мозга пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ), различающихся по степени проявления МЛУ-фенотипа, проведено сравнение уровней накопления хлорина е6 (Хл е6) и его этерифицированных производных: моно- и диметилового эфиров (ДМЭ и ТМЭ). Данные соединения имеют близкие фотофизические свойства и, как было показано ранее, являются перспективными фотосенсибилизаторами для целей фотодинамической терапии.

Анализ уровня накопления в клетках специфичных моноклональных антител, а также флуоресцентного зонда JC-1, являющегося субстратом P-gp 170, показал, что уровень экспрессии и функциональная активность данного белка в клетках IM9Vinc и IM9Tax более чем на два порядка выше в сравнении с клетками IM9. Установлена гетерогенность лейкемических клеток костного мозга пациентов с ОМЛ в уровне накопления JC-1, свидетельствующая о существовании субпопуляций лейкемических клеток, различающихся по функциональной активности P-gp 170.

Цитофлуориметрический анализ процессов накопления производных Хл е6 клетками различных линий показал, что равновесный уровень окрашивания IM9Vinc и IM9Tax клеток в сравнении с клетками исходной линии IM9 был ниже всего на 7-15, 12-17 и 15-30% для Хл е6, ДМЭ и ТМЭ соответственно. Аналогичные результаты были получены и при исследовании препаратов костного мозга больных ОМЛ. Установлено, что содержание ФС в лейкемических клетках с высокой функциональной активностью P-gp 170 (сниженный уровень накопления JC-1) на 50% для Хл е6 и 30% для ДМЭ меньше в сравнении с клетками, характеризующими невысокой активностью P-gp 170 (повышенный уровень накопления JC-1). Результаты ингибиторного анализа подтвердили слабую зависимость процессов накопления ФС в клетках от уровня активности белка МЛУ P-gp 170. Воздействие на клетки ингибитором Pgp-170 циклоспорином А приводило к резкому увеличению внутриклеточной концентрации JC-1. Присутствие циклоспорина А в среде, содержащей ФС, сопровождалось лишь незначительным (5-20%) возрастанием степени окраски хлоринами резистентных клеток.

Полученные результаты показывают, что для исследованных ФС возможно достижение относительно высоких концентраций в опухолевых клетках с выраженным МЛУ-фенотипом. Поскольку эффективность фотосенсибилизированного повреждения клеток непосредственно определяется уровнем внутриклеточного накопления ФС, можно заключить, что производные Хл е6 могут быть использованы для преодоления МЛУ при терапии онкологических заболеваний.