Цель исследования – разработать принципы обогащения концентрата пуповинной крови гемопоэтическими клетками, обеспечивающие соответствие его характеристик меж-дународным стандартам качества данного вида трансплантата, что позволит интегрировать деятельность создаваемого в республике Банка пуповинной крови в мировую сеть учрежде-ний данного профиля.

Стволовые клетки пуповинной крови (ГСК ПК) – наиболее перспективный вид транс-плантата при лечении заболеваний, требующих пересадки гемопоэтической ткани. В на-стоящее время идет формирование тканевого фонда Банка пуповинной крови на базе дейст-вующих структур Республиканского центра трансплантации костного мозга 9-й городской клинической больницы г. Минска.

Актив банка на сегодняшний день включает 50 образцов концентрата пуповинной крови, заготовленных в соответствии с инструкциями по примене-нию «Заготовка пуповинной крови с целью получения гемопоэтических стволовых клеток» (Регистрационный № 151-1203 от 29.11.2004 г.) и «Получение, криоконсервирование, хранение и контроль качества гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови» (Регистра-ционный № 151-1203 от 29.11.2004 г.). Находящиеся в банке образцы полностью соответст-вуют международным критериям и пригодны для применения в качестве трансплантатов ГСК. С целью стандартизации конечного продукта (концентрата пуповинной крови), вклю-чаемого в фонд банка, нами разработаны технические условия и технологическая инструк-ция, содержащие требования к получению и контролю основных параметров производства этого вида медицинской продукции, которое нами уже подготовлено к процедуре государст-венной регистрации.

К сожалению, в силу ограниченного объема получаемой ПК, готовые трансплантаты могут быть использованы преимущественно для проведения соответствующей терапии мла-денцам и детям. Этот факт служит предпосылкой к разработке методов искусственного обогащения трансплантатов ПК гемопоэтическими клетками.

При использовании отечественных гемокорректоров (неорондекса, спейсферона, микродеза и ладпуллина) в качестве потенциальных стимуляторов ex vivo экспансии ГСК ПК были получены результаты, подтверждающие непригодность данных препаратов для дости-жения вышеуказанной цели.

В качестве альтернативы ex vivo экспансии ГСК может быть использовано параллель-ное введение ГСК и мезенхимальных стволовых клеток (МСК). МСК способны поддерживать развитие и дифференцировку ГСК с помощью гуморальных факторов и межклеточного взаимодействия, то есть выполнять функции погибающей при преддтрансплантационной химио- или радиотерапии костномозговой стромы. Кроме того, они обладают иммуносу-прессивными свойствами, что снижает вероятность развития и степень выраженности «реак-ции трансплантат против хозяина».

Нами был проведен ряд экспериментов по совместному культивированию предвари-тельно облученных МСК, полученных в результате обработки жировой ткани человека кол-лагеназой I типа, и гемопоэтических CD 34+ клеток, выделенных их ПК человека методом иммуномагнитной сепарации. В результате наблюдений на первой неделе культивирования было зарегистрировано образование так называемых “cobble-stone” зон – плотных скоплений клеток характерной морфологии, внешне напоминающих булыжную мостовую. Такие зоны формируются наиболее ранними клетками-предшественниками гемопоэза и соответствуют очагам активного кроветворения in vivo.

С течением времени морфология этих клеток меня-ется, что говорит о протекании процессов дифференцировки в культуре (рис. 1).

Полученные результаты и дальнейшие исследования способности клеток ПК давать начало гемопоэтическим колониям после длительного культивирования на подложке из об-лученных МСК могут послужить основанием для разработки и введения в клиническую практику модифицированного метода трансплантации ГСК.