Цель исследования — разработка новых, более дешевых и эффективных питательных сред для выявления микобактерий туберкулеза (МБТ) и определения лекарственной чувствительности.

Трудности выделения МБТ из патологического материала связаны с биологическими особенностями возбудителя (медленность роста), а также со снижением жизнеспособности микобактерий в результате применения антибактериальных препаратов и различных методов обработки при посеве материала. Имеющееся большое количество питательных сред далеко не всегда отвечает необходимым требованиям, многие являются дорогостоящими, как и наиболее часто употребляемая среда Левенштейна — Йенсена.

Целью работы было создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования и ускорение роста МБТ.

Поставленная задача решается путем создания яично-овощной плотной питательной среды (Кузнецова), созданной на базе среды Левенштейна — Йенсена со значительным уменьшением дорогостоящих ингредиентов и добавлением отваров белой фасоли и моркови.

При подборе ингредиентов для нее исходили из того, чтобы обеспечить нужное количество и качество белкового состава за счет фасоли и яиц, углеводов — за счет картофеля, витаминов — за счет моркови.

Предлагаемая среда хорошо сворачивается, не отстает от стенок пробирок и по внешним свойствам (цвет) напоминает среду Левенштейна — Йенсена. Приготовленный фильтрат отваров белой фасоли, картофеля и моркови может храниться при 0–4° C в течение 3 мес., не изменяя своих свойств.

Были проведены сравнительные испытания яично-овощной среды и среды Левенштейна — Йенсена в отношении роста МБТ. Провели 22 сравнительных посева чистой культуры М. tuberculosis (H37RV) на яично-овощную среду и на среду Левенштейна — Йенсена. Было установлено, что чистая культура МБТ растет на яично-овощной среде так же хорошо, как и на среде Левенштейна — Йенсена (75% роста на 7-й день, 100% роста на 8-й день инкубации). Цвет и форма колоний

МБТ на обеих средах идентичны друг другу. Массивность роста на 7–8-й день инкубации несколько выше на среде Кузнецова.

Было произведено 80 сравнительных посевов мокроты от пациентов, страдающих туберкулезом (бактериовыделителей), установлено следующее:
– скорость первичного роста МБТ на яично-овощной среде идентична таковой на среде Левенштейна — Йенсена;
– рост во всех пробирках на обеих средах идентичен друг другу и одновременен.

Для ускорения роста МБТ было решено использовать простой и доступный способ, включающий в себя замораживание и оттаивание среды. Способ осуществляют следующим образом: разлитую по пробиркам и свернутую среду Левенштейна — Йенсена замораживают в морозильной камере бытового холодильника при температуре –10–12° С в течение 16–20 ч. Полноту замораживания среды контролируют визуально. Затем среду оттаивают при комнатной температуре в течение 2–2,5 ч до полного оттаивания, после чего сразу производят посев исследуемого материала.

Время замораживания 16–20 ч обосновано тем, что за меньшее время не достигается полное замораживание среды.

Для контрольных исследований использовали не подвергавшуюся замораживанию среду.

Выделение культуры в срок до 10 дней произошло в 8 случаях (87%) в опытной группе и не выявлено в контрольной группе (р < 0,05). До 20 дней — 73,9 и 57,1% соответственно (р < 0,05). Из 104 посевов рост культуры в опытной группе получили в 92 случаях, в контрольной — в 84.

Таким образом, предлагаемая плотная яично-овощная среда обеспечивает культивирование МБТ аналогично среде Левенштейна — Йенсена, при этом стоимость яично-овощной питательной среды в 2,5–3,5 раза ниже стоимости среды Левенштейна — Йенсена. Предлагаемый способ ускорения роста микобактерий путем замораживания и оттаивания действительно позволяет ускорить рост МБТ, что приведет к повышению эффективности бактериологической диагностики туберкулеза. Способ прост в исполнении, эффективен и может быть использован в любой фтизиатрической клинике.