Многие современные диагностические препараты не позволяют идентифицировать возбудителей кишечных инфекций, так как рассчитаны на выявление только определенного серовара. Секретируемые энтеробактериями токсины имеют значительное видовое сходство. Так, например, термостабильный токсин Yersinia pseudotuberculosis продуцируют 82,6% штаммов, независимо от серовара возбудителя. Наличие антигенных свойств у них позволяет создать диагностикумы для выявления продуцирующих токсин бактерий большинства сероваров данного вида.

Цель работы — выделить в препаративных количествах эндотоксины Yersinia pseudotuberculosis и Escherichia coli O157: Н7, охарактеризовать некоторые их физико-химические свойства, получить анатоксины и высокоэффективные кроличьи антитоксические сыворотки.

В качестве продуцентов токсинов использовали штаммы Yersinia pseudotuberculosis 512 1 серовар и Escherichia coli О157: Н7. Концентрация инокулятов составляла 10⁹ КОЕ/мл. Бактерии культивировали на мясопептонном агаре (рН 7,2) в течение 24 ч при 37° С для Escherichia coli и в течение 48 ч при 22° С для Yersinia pseudotuberculosis. В этих условиях из 1 л среды при последующей очистке удается выделить около 1 мг термостабильного токсина. Молекулярную массу определяли гелефильтрацией на колонке (1,6×60 см) с сорбентом Superdex-200. Колонку калибровали следующими белками: ферритином — 480 кДа, альдолазой — 147 кДа, БСА — 67 кДа, овальбумином — 47 кДа, химотрипсином А — 25 кДа, цитохромом С — 12,4 кДа.

Для определения цитотоксической активности эндотоксины (концентрация 100 мкг/мл) вносили на монослой клеток Vero (взвесь 200 000 кл/мл, выращивали 24 ч при 37? С в лунках модулей бактометра «BioMerieux Vitek Inc»). В качестве контроля использовался монослой клеток без токсинов.

По своим физико-химическим свойствам выделенные токсины идентичны шигаподобному токсину и иерсиниозному токсину. Молекулярная масса токсина Yersinia pseudotuberculosis составляла 50 кДа, а Escherichia coli — 80 кДа. Выделенные токсины подавляли жизнедеятельность монослоя культуры перевиваемых клеток Vero. Таким образом, была показана цитотоксическая активность выделенных белковых препаратов, что подтверждает роль токсинов как факторов патогенности продуцирующих их возбудителей.

Полученные токсины были лиофильно высушены, переведены в анатоксины и использованы для получения моноспецифических кроличьих сывороток. Иммунизацию проводили по следующей схеме. Первая инъекция: кроликам внутримышечно вводили 30 мкг полученного анатоксина с равным объемом эмульсигена (EMULSIGEN, MVP Laboratories USA). Через 30 дней повторно вводили 60 мкг анатоксина с эмульсигеном (вторая инъекция). Затем через 14 дней вводили 60 мкг анатоксина с эмульсиногеном (третья инъекция). Сыворотки получали на 10-й день после последней иммунизации.

Выделенные препараты токсинов энтеробактерий пригодны для получения моноспецифических антисывороток, что создает предпосылку для разработки иммунологических методов обнаружения токсигенности штаммов энтеробактерий, участвующих в развитии патологических процессов в организме человека.