Целью работы стало изучение влияния различных экстремальных факторов (облучение, цитокины, цитостатические препараты) на клеточный цикл и апоптоз мононуклеаров здоровых доноров и больных хроническими лейкозами.

Апоптоз представляет собой универсальный механизм как физиологической, так и патологической клеточной гибели. Одной из областей, где широко ведутся исследования апоптоза, является химиотерапия злокачественных образований и гемобластозов. Ранее считалось, что опухолевый рост связан только с неконтролируемой пролиферацией. Сейчас установлено, что нарастание клеточной массы при злокачественных новообразованиях может быть также связано с нарушением процесса гибели клеток.

В качестве объекта исследования использовались мононуклеары костного мозга здоровых доноров и больных хроническими лейкозами (ХЛ). Клетки в концентрации 3 млн/мл в течение 24 ч инкубировались с опытными концентрациями исследуемых агентов. Часть образцов облучали Х-лучами на рентгеновской установке РУМ-17 в 24-луночных платах (Nunc, Дания), мощность дозы 0,19 Дж/кг/мин, напряжение 190 кВ, сила тока 5 мА, фильтр Cu 0,5 мм. Аналитическую цитометрию проводили на проточном цитофлуориметре «FACScan».

На первом этапе работы нами были установлены значения исследуемых параметров лимфоцитов периферической крови здоровых людей. Полученные показатели были использованы далее для сравнения с аналогичными параметрами клеток при хронических лимфо- (ХЛЛ) и миелолейкозах (ХМЛ).

Прежде всего следует отметить, что значения основных параметров клеточного цикла как для клеток здоровых доноров, так и для клеток пациентов с ХМЛ и ХЛЛ характеризовались высокой индивидуальной вариабельностью.

Все изучаемые физические и химические факторы вызывали незначительные изменения количественного распределения клеток по фазам клеточного цикла у здоровых доноров. Только рекомбинантный a-фактор некроза опухолей в 3,4 раза увеличивал соотношение S/(G2 + M).

Образцы больных ХМЛ и ХЛЛ существенно отличались друг от друга и от мононуклеаров здоровых доноров по количеству клеток, находящихся в S-фазе клеточного цикла: при ХМЛ их уровень в 4,6 раза превышал аналогичный показатель для здоровых доноров, в то время как при ХЛЛ количество клеток в S-фазе было в 2,6 раза ниже нормы. В тоже время по количеству клеток в G2 + M при ХМЛ не наблюдалось существенных отличий от мононуклеаров здоровых доноров, тогда как для ХЛЛ этот показатель в 2,2 раза был выше нормы. Принципиальным отличием клеток костного мозга больных ХЛЛ как от здоровых доноров, так и от больных ХМЛ было более низкое соотношение S/(G2 + M). ХМЛ же, наоборот, характеризовался более высоким соотношением S/(G2 + M) по сравнению с нормальными клетками. Что касается влияния различных экстремальных факторов на клеточный цикл, то в основном они проявились в виде изменения соотношения S/(G2 + M).

Между группами здоровых доноров и больных с ХМЛ и ХЛЛ выявлены достоверные отличия (р = 0,05) по уровню спонтанного апоптоза культивированных клеток. Клетки больных ХМЛ характеризовались в 1,7 раза большими по сравнению с клетками здорового костного мозга значениями спонтанного апоптоза при оценке методом проточной цитофлуориметрии. У больных ХЛЛ отмечался более низкий уровень спонтанного апоптоза: количество апоптотических клеток в 9,7 раза было ниже аналогичного показателя для группы здоровых доноров и в 16,6 раза ниже показателя для группы больных ХМЛ.

Все исследованные в данной работе факторы индуцировали апоптотические процессы как в мононуклеарах здоровых людей, так и в клетках больных ХЛЛ. При ХМЛ большинство использованных физических и химических факторов снижало уровень апоптоза. Исключение составило воздействие смеси рекомбинантный ИЛ-3 + грануломоноцитарный-колониестимулирующий фактор + эретропоэтин, которая вызвала незначительное увеличение уровня апоптоза.

Выявленные отличия в уровнях спонтанного и индуцированного апоптоза клеток больных ХМЛ и ХЛЛ, по-видимому, могут быть обусловлены различиями субстратов патологического процесса при данных гемобластозах — пролиферативными потенциалами клеток при этих патологиях и долей бластных форм в общей морфологической картине костного мозга.

Оценивая информативность уровня спонтанного индуцированного апоптоза и различных параметров клеточного цикла, следует отметить, что наиболее существенные изменения между группами больных с ХМЛ и ХЛЛ выявлены для апоптотических процессов, S-фазы и для соотношения S/(G2 + M). Таким образом, именно эти показатели представляются наиболее информативным при изучении клеточной биологии ХМЛ и ХЛЛ, а использованная в данном исследовании экспериментальная модель может быть предложена для дальнейшего изучения этиопатогенеза данных заболеваний.