Реальные предпосылки для разработки отечественных диагностических препаратов и осуществления повсеместной серологической диагностики болезни Лайма (БЛ) в республике появились в результате выделения в БелНИИЭМ в 1996 г. отечественных штаммов боррелий - возбудителей этого заболевания, на основании которых в 1997 г. был создан и внедрен в практику здравоохранения первый диагностический препарат - тест-система иммунофлуоресцентная для выявления антител к возбудителям Лайм-боррелиоза.

Учитывая необходимость проведения широких диагностических исследований среди населения республики для выявления как ранних, так и поздних (хронических) форм инфекции, чрезвычайно актуальной в практическом плане задачей является разработка более специфичной иммуноферментной тест-системы, отличающейся высокой чувствительностью, простотой выполнения, сокращением сроков исследования и возможностью автоматизации при проведении массовых анализов. На сегодняшний день эти тест-системы в различных модификациях являются основным инструментом при верификации БЛ в большинстве диагностических лабораторий Западной Европы, Юго-Восточной Азии и США.

Для создания иммуноферментной тест-системы, основанной на отечественных штаммах возбудителя, использовали два варианта антигенных препаратов - цельноклеточный и обработанный ультразвуком лизат культуры боррелий, приготовленные на основе штамма Гр-168, который был выделен из клещей I. ricinus, собранных на территории Гродненской области в 1996 г. Расширенные сравнительные исследования в твердофазном иммуноферментном анализе (ТИФА) сыворотки крови 407 больных с подозрением на Лайм-боррелиоз показали высокую активность обоих антигенных препаратов (более 80%), однако простота приготовления, высокая эффективность и экономичность цельноклеточного антигена позволили определить его в качестве основы при создании экспериментальных наборов иммуноферментной тест-системы для выявления антител к возбудителям БЛ.

С целью отработки технологии получения диагностического препарата проводили исследования по оптимизации условий постановки иммуноферментного анализа и подбор качественного и количественного состава ингредиентов.

В результате нами была приготовлена экспериментальная серия иммуноферментной тест-системы и проведена оценка ее диагностической чувствительности и специфичности.

Диагностическую чувствительность определяли при тестировании 63 сывороток крови больных с клинически подтвержденным диагнозом «болезнь Лайма» с различными формами проявления инфекции. Результаты эксперимента показали высокий уровень чувствительности тест-системы - 87,5%, что соответствует мировым аналогам.

Диагностичекую специфичность препарата оценивали при исследовании в ТИФА 65 сывороток крови практически здоровых людей - доноров института переливания крови, группы практически здоровых детей, а также больных с различными диагнозами, исключающими Лайм-боррелиоз. Результаты исследований показали высокий уровень специфичности тест-системы, который составил 90,3%, что коррелирует с данными литературы.

При исследовании 7 сывороток крови больных с диагнозом «сифилис» были получены высокоположительные результаты во всех случаях, что можно обьяснить близким генетическим родством возбудителей сифилиса и Лайм-боррелиоза (принадлежность к одному семейству Spirochaetaceae). Учитывая данное обстоятельство, во избежание положительных перекрестных реакций, необходимо исключать из анализа материал от больных с диагнозом «сифилис».

Проведенные испытания показали способность тест-системы выявлять антитела в сыворотке крови людей методом ТИФА, а также диагностическую надежность и эффективность разработанного препарата.

Нами подготовлена инструкция по применению иммуноферментной тест-системы и разрабатывается лабораторный регламент на производство данного диагностического препарата.